Méthode biologique d’évaluation de la pollution des eaux

La méthode biologique utilisant la Daphine (Daphine Magna Stranss) est employée pour déterminer la toxicité aiguë d’échantillons liquides
La Daphine est un micro crustacé des eaux douces de l’ordre des Cladocères
Le test consiste à mesurer le pourcentage de mortalité après une période d’exposition de 48h
1) domaine d’application :
Elle s’applique à des échantillons liquides tels que les eaux usées industrielles, les eaux municipales (agricoles) ainsi que toute solution susceptible de contenir des substances toxiques
2) principe et théorie :
Le test consiste à déterminer la concentration de l’échantillon qui cause 50% de mortalité après 48h d’exposition (Cl -48h)
Le test inclut aussi la mesure du pourcentage d’immobilité (CE -48h)
3) fiabilité :
Un PH, une dureté ou une concentration en O2 dissout se situant hors des limites de tolérance de l’espèce peuvent affecter les organismes et rendre impossible le discernement des effets reliés aux substances toxiques présentes dans l’échantillon
Les échantillons fortement colorés peuvent interférer avec la détermination du battement cardiaque si cette observation l’immobilité est alors l’effet mesuré
4) organisme biologique :
L’organisme est Daphinia Magna Stranss au stade neonate ( 24h)
la solution mère de toxique de référence est du bichromate de potassium à raison de 200mg /1000ml d’eau ultra pure
Protocole d’analyse :
Dans un 1er temps, on mesure la température, le PH, l’O2 dissout, la conductivité et la dureté de l’échantillon
Exemple :
Si la dureté est 50 mg/l de CaCO3, il faut ajuster à 50mg/l avec une solution de chlorure de Ca et MgCl2
On choisit généralement une série de 5 concentrations avec un facteur de dilution géométrique
Nombre de tubes par concentration = 4
Nombre de Daphine par tube = 5
Durée du test = 48h
Effet mesuré = mortalité, immobilité
Expression des résultats:
Cl -48h ….
CE -48h ….
Le test définitif permet de déterminer la Cl -48h
Donc pour chaque concentration et pour le témoin on prépare 4 tubes a essai de 25ml contenant des volumes croissants de l’échantillon et on complète à 8ml avec de l’eau de dilution, puis on transfère dans les 4 tubes 5néonates/tube à l’aide d’une pipette pasteur
Les tubes témoins serviront pour les mesures physicochimiques (comme l’O2 dissout, PH, température), ils ne contiennent pas de Daphine
On inocule tous les tubes pendant 48h à 20°C ±2
Apres 48h d’incubation, on dénombre les Daphines immobiles ou mortes
La mortalité est déterminée par l’absence de mouvements des appendices et absence de battement cardiaque
L’immobilité est une inaptitude à la nage pendant les 15 secondes qui suivent une légère agitation du tube à essai