Méthodes d'analyse toxicologique

par **mounaliza** Dim 20 Juil 2008 - 4:34

Réaction colorée:

Certaines substances qui mises au contact de réactif produisent une réaction colorée

Réaction colorée directe:

un volume d'échantillon (urine, liquide de lavage gastrique) + un volume de réactif.

Réaction colorée après extraction:

-Réactif de forrest pour les phénothiazines--->rouge, bleu, violet, orange
-Réaction de trinder pour les salicylés--->violet
-Réaction au furfural pour les carbamates--->violet

Remarque: cette méthode est peu sensible, risque d'interférence

Méthodes spectrales:

Spectromètre d'absorption UV-visible:

Principe du spectrometre UV-visible:

Repose sur la loi de beer lambert

Application:

Identification de toxique= détermination du spectre UV d'une molécule. ex: barbiturique
Quantification: l'absorbance est fonction de la concentration
Effectuer une gamme d'étalonnage.
ex: réaction colorée de Trinder pour les salicylés

Spectrometre d'absorption IR:

Meme principe que l'absorption UV-visible
ex: CO,CH4,NO2,SO2

Spectromètre d'absorption atomique (SAA)

Principe;

consiste à mesurer la lumière absorbée à une certaine longueur d'onde pour des atomes non excités de l'élément à doser.
L'atomisation se fait dans la flamme ou dans le four.

Appareillage:

-Une source lumineuse émettant la raie requise par le dosage
-Un dispositif d'atomisation= four ou flamme
-Un système monochromateur afin d'isoler la raie de mesure
-Un detecteur.

Avantages:

-Dosage de plusieurs éléments (As,Se..) et métaux lourds (plomb, mercure..)
-Très sensible et spécifique.

Méthodes immunologiques:

Principe général: ces méthodes utilisent:

-Anticorps spécifiques de la molécule à doser.
-Antigènes (substances à doser)
-On induit la formation d'un complexe Ag-Ac

Méthodes immunoenzymatiques: (EMIT)

EMIT:enzyme multifid immin-assay technique, se fait en 2 étapes (phase homogène)

Une réaction immunologique: compétition de l'antigène et l'antigène marqué par enzyme pour se fixer sur l'anticorp spécifique.

Une réaction enzymatique: les molécules marquées libres agissent sur une coenzyme en modifiant l'absorbance u mileu de l'UV

Avantages; sensible, rapide et relativement spécifique permet:
dosage particulier
dépistage par classe chimique (barbiturique, benzodiazépine)

Technique radio-immunologique: (RIA)
Ag marqué par un isotope radioactif (phase hétérogène)

Avantages:
Dosage rapide de plusieurs médicaments
Grande sensibilité (100 pg, 1mg) mais cout élevé.

Technique de polarisation de fluorescence FPIA:

FPIA; fluorescence-polarisation-immuno-arsal, Ag marqué par la fluorescence.

Méthodes chromatologiques:

Chromatographie sur couche mince: CCM

Principe:

Repose sur la différence de vitesse de migration sur une couche fine d'un produit absorbant sous l'action d'un mélange de solvant (éluant) dans une cuve étanche.

La révélation se fait après séchage de la plaque sous lampe UV à 254 nm et 350 nm
Calcul du rapport frontal: RF
Révélation par des réactions de coloration.

Chromatographie en phase liquide à haute performance (HPLC)

Principe:

Séparation des substances dans une colonne contenant une phase stationnaire.
Une phase mobile traverse cette colonne.
Phase mobile-liquide.

Appareillage:

HPLC est composé de:
-Un reservoir de solvant.
-Un système de pompage
-Un système d'injection de l'échantillon à analyser.
-Une colonne chromatographique.
-Un détecteur;
Spectrophotometre d'absorption UV
Détecteur a barette de diode
Détecteur éléctronique
Comptage à la spectrophotométrie de masse

Avantage:

Technique très sensible et spécifique
Dosage de composés polaires, apolaires et volatils, composés thermosensibles.